Количественное определение и клиническая значимость сывороточного паратиреоидного гормона 1-84 методом иммунозахвата с LC-MS/MS при хронической почечной недостаточности
Введение
Точное измерение уровня паратиреоидного гормона (PTH) в сыворотке крови играет ключевую роль в диагностике и лечении эндокринных и остеологических заболеваний. Однако традиционные иммуноанализы сталкиваются с проблемами кросс-реактивности между полноразмерным PTH и его усеченными фрагментами или посттрансляционно модифицированными формами. Кроме того, стандартизация методов анализа PTH и стабильность пептида остаются актуальными вопросами.
Цель исследования
Целью данного исследования была разработка метода иммунозахвата в сочетании с жидкостной хроматографией-тандемной масс-спектрометрией (LC-MS/MS) для точного количественного определения PTH1-84 в сыворотке крови у пациентов с хронической почечной недостаточностью.
Методы
PTH1-84 выделяли из 1 мл образцов сыворотки с помощью иммунозахвата на полистироловых шариках, после чего элюировали и количественно определяли методом LC-MS/MS. Результаты анализа 268 образцов сыворотки сравнивали с данными иммуноанализа интактного PTH.
Результаты
- Линейный диапазон анализа составил 5.0-1000.0 пг/мл.
- Внутрианалитические коэффициенты вариации (CV) варьировали от 3.2 % до 6.8 %, а межаналитические CV — от 4.6 % до 9.5 %.
- Эффективность экстракции составила 98.0 %-100.5 %, при этом значимых матричных эффектов после коррекции по внутреннему стандарту не наблюдалось.
- Коэффициент корреляции между LC-MS/MS и иммуноанализом составил 0.989, однако между методами было выявлено существенное смещение.
Выводы
Метод иммунозахвата в сочетании с LC-MS/MS демонстрирует высокую точность и воспроизводимость при измерении PTH1-84. Несмотря на хорошую корреляцию с иммуноанализом, наблюдаемое смещение указывает на необходимость стандартизации методов измерения PTH. Предложенный подход может стать перспективным инструментом для клинической диагностики.
Термины и сокращения
- PTH — паратиреоидный гормон (parathyroid hormone).
- PTH1-84 — интактная форма паратиреоидного гормона, состоящая из 84 аминокислот.
- LC-MS/MS — жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия (liquid chromatography-tandem mass spectrometry).
- CV — коэффициент вариации (coefficient of variation).