Количественное определение и клиническая значимость сывороточного паратиреоидного гормона 1-84 методом иммунозахвата с последующим LC-MS/MS у пациентов с хронической почечной недостаточностью

Введение

Точное измерение уровня паратиреоидного гормона (PTH) в сыворотке крови играет ключевую роль в диагностике и лечении эндокринных и остеологических заболеваний. Однако традиционные иммуноанализы сталкиваются с проблемами кросс-реактивности между полноразмерным PTH и его усеченными фрагментами или посттрансляционно модифицированными формами. Кроме того, стандартизация методов измерения PTH и стабильность пептида остаются актуальными вопросами.

Цель

Целью данного исследования было разработать метод иммунозахвата в сочетании с жидкостной хроматографией-тандемной масс-спектрометрией (LC-MS/MS) для точного количественного определения PTH1-84, что позволило бы преодолеть ограничения традиционных иммуноанализов.

Методы

PTH1-84 выделяли из 1 мл образцов сыворотки крови с помощью иммунозахвата на полистироловых шариках, после чего элюировали и количественно определяли методом LC-MS/MS. Результаты анализа 268 образцов сыворотки сравнивали с данными иммуноанализа интактного PTH.

• Линейный диапазон метода составил 5.0–1000.0 пг/мл.
• Коэффициенты вариации внутри анализа (CV) варьировали от 3.2% до 6.8%, а между анализами — от 4.6% до 9.5%.
• Эффективность экстракции составила 98.0–100.5%, при этом значимых матричных эффектов после коррекции по внутреннему стандарту не наблюдалось.

Результаты

Коэффициент корреляции между методами LC-MS/MS и иммуноанализа составил 0.989, однако между методами было выявлено существенное смещение. Несмотря на это, метод иммунозахвата в сочетании с LC-MS/MS продемонстрировал высокую точность и воспроизводимость.

Выводы

Разработанный метод иммунозахвата с последующим LC-MS/MS анализом представляет собой перспективный подход для точного измерения PTH1-84, что особенно важно для пациентов с хронической почечной недостаточностью. Этот метод позволяет минимизировать влияние кросс-реактивности и обеспечивает высокую специфичность и воспроизводимость результатов.

Термины и сокращения

• PTH — паратиреоидный гормон (parathyroid hormone).
• PTH1-84 — интактная форма паратиреоидного гормона.
• LC-MS/MS — жидкостная хроматография-тандемная масс-спектрометрия (liquid chromatography-tandem mass spectrometry).
• CV — коэффициент вариации (coefficient of variation).