Идентификация различных профилей глиобластомы путем иммунозахвата внеклеточных везикул из плазмы пациентов

Введение

Глиобластома (GBM) — это первичная опухоль головного мозга, характеризующаяся внутриопухолевой гетерогенностью и динамическими пространственно-временными изменениями. Внеклеточные везикулы (EVs), выделяемые GBM, отражают характеристики опухоли и могут служить потенциальными маркерами для ранней диагностики и мониторинга с помощью жидкостной биопсии.

Цель исследования

Целью данного исследования была оценка молекулярных сигнатур EVs, выделенных из плазмы пациентов с GBM, с использованием стандартного проточного цитометра.

Методы

EVs были выделены из плазмы пациентов с глиомой и здоровых доноров (HCs) методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности (DGU). Для анализа использовалась мультиплексная методика на основе микрочастиц в стандартном проточном цитометре. Дополнительно применялись:

• метод главных компонент (PCA),
• иерархическая кластеризация,
• корреляционный анализ.

Визуализация EVs проводилась с помощью просвечивающей и сканирующей электронной микроскопии (STEM).

Результаты

Мультиплексный анализ позволил определить уровни 37 поверхностных маркеров EVs, включая опухолеассоциированные антигены, маркеры раковых стволовых клеток, эндотелиальных и иммунных клеток. PCA выявил маркеры, наиболее значимые для дифференциации пациентов и здоровых доноров. Иерархическая кластеризация показала четыре отдельных кластера на основе уровней поверхностных маркеров EVs.

Молекулярные сигнатуры EVs продемонстрировали значительную гетерогенность между кластерами пациентов. CD29 оказался не только определяющим фактором для одного из кластеров, но и маркером, позволяющим отличить пациентов от здоровых доноров.

Выводы

Исследование подтвердило, что EVs из плазмы пациентов с GBM несут уникальные молекулярные сигнатуры, отражающие гетерогенность опухоли. CD29 может служить перспективным маркером для дифференциальной диагностики. Использование стандартного проточного цитометра делает метод доступным для клинического применения.

Термины и сокращения

• GBM — глиобластома (Glioblastoma)
• EVs — внеклеточные везикулы (Extracellular Vesicles)
• HCs — здоровые доноры (Healthy Controls)
• DGU — ультрацентрифугирование в градиенте плотности (Density Gradient Ultracentrifugation)
• PCA — метод главных компонент (Principal Component Analysis)
• STEM — просвечивающая и сканирующая электронная микроскопия (Scanning and Transmission Electron Microscopy)